Constituants chimiques des espèces Helianthemum hirtum ssp. ruficomum (Cistaceae) et Onobrychis crista-galli (Fabaceae)

Abstract

La présente étude est dédiée à la recherche des constituants chimiques de deux plantes locales, en l’occurence Helianthemum hirtum ssp. ruficomum (Cistaceae) et Onobrychis crista-galli (Fabaceae), en plus de l’évaluation des activités antioxydantes et anti-inflammatoires de leurs extraits. L’investigation chimique portant sur les extraits AcOEt et n-BuOH des deux plantes citées, a abouti à la caractérisation de 26 composés naturels. Ces deniers ont été isolés par les méthodes chromatographiques (CCM, VLC, CC, MPLC et HPLC semipréparative). Leurs structures ont été établies au moyen de techniques d’analyse spectroscopiques (RMN 1D et 2D, la spectrométrie de masse à haute résolution HR-ESIMS, ESI-MS), la mesure du pouvoir rotatoire [α]D et la comparaison des données spectrales avec celles décrites dans la littérature. Les extraits AcOEt et n-BuOH de l’espèce Helianthemum hirtum ssp. ruficomum ont fourni 11 composés connus, constitués principalement de composés polyphénoliques dont un néolignane glucoside, six flavonoïdes, deux dérivés d’acide benzoïque et deux dérivés d’acide quinique. Quinze composés ont été également isolés des extraits AcOEt et n-BuOH de l’espèce Onobrychis crista-galli. Ils se répartissent en six flavonoïdes, un monoterpène lactonique, deux dérivés d’acide benzoïque, un dérivé de l’eugénol, un cyclitol, trois osides libres et un phytostérol. La teneur totale en composés phénoliques a été déterminée en utilisant le réactif de Folin-Ciocalteu tandis que les flavonoïdes ont été quantifiés par dosage direct au moyen du tri-chlorure d’aluminium. Les résultats révèlent que les extraits AcOEt des deux plantes sont les plus riches en polyphénols totaux. L’extrait AcOEt de H. hirtum et l’extrait n- BuOH de la plante O. crista-galli ont les teneurs les plus élevées en flavonoïdes. L’évaluation in vitro des activités antioxydantes des différents extraits des deux plantes, a été réalisée par usage de cinq méthodes : DPPH, ABTS, CUPRAC, DMSO alcalin, -carotène. Cinq flavonoïdes (OC1, OC2, OC3, OC4 et OC6) isolés à partir de la plante O. crista-galli ont été évalués par les méthodes DPPH et CUPRAC. Les résultats des ces tests montrent que les extraits AcOEt des deux plantes ainsi que les cinq flavonoïdes présentent un bon pouvoir antioxydant. L’activité anti-inflammatoire in vitro des extraits EP, AcOEt et n-BuOH de la plante O. crista-galli a été effectuée selon la méthode d’inhibition de la dénaturation des protéines. L’extrait acétate d’éthyle révèle une excellente activité anti-inflammatoire. The present study is dedicated to the research of the chemical constituents from two local plants named Helianthemum hirtum ssp. ruficomum (Cistaceae) and Onobrychis crista-galli (Fabaceae), and the evaluation of the antioxidant and anti-inflammatory activities of their organic extracts and some isolated secondary metabolites. The chemical investigation of the EtOAc and n-BuOH extracts of the two plants led to the isolation and characterization of 26 natural compounds. Indeed, the isolates were obtained by chromatographic methods (VLC, CC, TLC, MPLC and semi-preparative HPLC). Their structures were established using spectroscopic analysis (1D and 2D NMR, high resolution mass spectrometry HR-ESI-MS, ESI-MS), the measurement of the optical rotation [α]D and by comparison of their spectral data with those described in the literature. The EtOAc and n-BuOH extracts of Helianthemum hirtum ssp. ruficomum species provided 11 known compounds, consisting mainly of polyphenolic compounds including a neolignan glucoside, six flavonoids, two derivatives of benzoic acid and two derivatives of quinic acid. Fifteen secondary metabolites were also isolated from the EtOAc and n-BuOH extracts of Onobrychis crista-galli species. They are divided into six flavonoids, a lactone monoterpene, two derivatives of benzoic acid, a derivative of eugenol, a cyclitol, three free osides and a phytosterol. The total content of phenolic compounds was determined using the Folin-Ciocalteu reagent while the flavonoids were quantified by direct determination with aluminum trichloride. The results revealed that the EtOAc extracts of the two plants possess the greatest content in total polyphenols. Moreover, the EtOAc extract of H. hirtum and the n-BuOH extract of the plant O. crista-galli have the highest flavonoid contents. The in vitro evaluation of the antioxidant activity of the different extracts of the two plants was performed using five methods termed DPPH, ABTS, CUPRAC, alkaline DMSO and -carotene. Five flavonoids (OC1, OC2, OC3, OC4 and OC6) isolated from the plant O. crista-galli were evaluated by the DPPH and CUPRAC assays. The results showed that the extracts and the five flavonoids have a good antioxidant power. The in vitro anti-inflammatory activity of the PE, EtOAc and n-BuOH extracts obtained from O. crista-galli plant was carried out according to the method of inhibition of protein denaturation. The ethyl acetate extract exhibited an excellent anti-inflammatory activity. هذه الدراسة مخصصة للبحث في المكونات الكيميائية لنبتتين محليتين، في هذه الحالة ،Onobrychis crista-galli (Fabaceae) و Helianthemum hirtum ssp. ruficomum (Cistaceae) بالإضافة إلى تقييم الأنشطة المضادة للأكسدة والمضادة للالتهابات لمستخلصاتها. للنبتتين المذكورتين سابقا، n-BuOH و AcOEt أسفر الفحص الكيميائي لمستخلصات إلى عزل 26 مركبًا طبيعيًا. و التي تم الحصول عليهم من خلال استعمال مختلف الطرق تم تحديد بنيتهم .(CCM, VLC, CC, MPLC et HPLC semi-préparative) الكروماتوغرافية الكيميائية باستخدام تقنيات التحليل الطيفي (مطيافية الرنين النووي المغناطيسي ذات بعد واحد و حساب زاوية التدوير ،ESI-MS و HR-ESI-MS و ذات بعدين، مطيافية الكتلة عالي الدقة النوعي وبمقارنة البيانات الطيفية مع تلك الموصوفة في الدراسات السابقة. الخاصين بالنبتة n-BuOH و AcOEt الأعمال المنجزة على المستخلصين تم من خلالها عزل 11 مركبا معروفا، Helianthemum hirtum ssp. ruficomum (Cistaceae) يتكون بشكل أساسي من مركبات بوليفينوليك بما في ذلك نيوليان غليكوسيدي ، وستة مركبات فلافونويدية، ومشتقتين من حمض البنزويك ومشتقين من حمض الكينيك. من النبتة n-BuOH و AcOEt كما تم عزل خمسة عشر مركبا من مستخلصات وهي مقسمة إلى ستة فلافونويدات، مونوتاربان لاكتون، مشتقان من Onobrychis crista-galli. حمض البنزويك، مشتق من الأوجينول، سيكلتول، ثلاث مركبات سكرية حرة، وفيتوستيرول. بينما تم Folin-Ciocalteu تم تحديد المحتوى الكلي للمركبات الفينولية باستخدام كاشف تحديد كمية مركبات الفلافونويدات عن طريق التحديد المباشر باستخدام ثلاثي كلوريد للنبتتين هي الأغنى في إجمالي البوليفينول. AcOEt الألمنيوم. أظهرت النتائج أن المستخلصات O. crista- للنبتة n-BuOH و مستخلص H. hirtum من AcOEt بينما يحتوي مستخلص على أعلى محتويات من الفلافونويدات. galli تم إجراء التقييم المخبري للأنشطة المضادة للأكسدة من المستخلصات المختلفة الخاصة بالنسبة .-carotène, DMSO alcalin, CUPRAC, ABTS, DPPH : للنبتتين باستخدام خمس طرق O. crista- المعزولة من نبتة (OC6, OC4, OC3, OC2 , OC لخمسة مركبات الفلافونوييدية ( 1 تظهر نتائج هذه الاختبارات أن .CUPRAC, DPPH فتقييم نشاطها الاكسدي بطريقتين هما galli من النبتتين و بالإضافة إلى الفلافونويدات الخمسة لديها قوة مضادة AcOEt مستخلصات للأكسدة جيدة. n-BuOH و AcOEt و EP تم تنفيذ النشاط المضاد للالتهابات المخبري من المستخلصات الثلاثة وفق ًا لطريقة تثبيط تمسخ البروتين. يظهر مستخلص أسيتات الإيثيل نشاطًا O. crista-galli من نبات ممتازًا مضادًا للإلتهابات.